在做檢測(cè)時(shí),有不少關(guān)于“菌落總數(shù)檢測(cè)方法有幾種”的問(wèn)題,這里百檢網(wǎng)給大家簡(jiǎn)單解答一下這個(gè)問(wèn)題。

菌落總數(shù)檢測(cè)方法有平板計(jì)數(shù)法、膜過(guò)濾計(jì)數(shù)法、比濁法、ATP生物發(fā)光法、快速檢測(cè)試劑盒、分子生物學(xué)方法、免疫學(xué)方法。

一、菌落總數(shù)檢測(cè)方法

1、平板計(jì)數(shù)法

依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 4789.2-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》進(jìn)行。該方法通過(guò)將樣品在營(yíng)養(yǎng)瓊脂（PCA）平板上進(jìn)行稀釋涂布，然后在37℃下培養(yǎng)48小時(shí)，通過(guò)肉眼或使用放大鏡和菌落計(jì)數(shù)器記錄菌落數(shù)量，以CFU（菌落形成單位）表示。

2、膜過(guò)濾計(jì)數(shù)法

膜過(guò)濾計(jì)數(shù)法是一種分離和計(jì)數(shù)微生物的實(shí)用技術(shù)，特別適用于那些難以通過(guò)傳統(tǒng)平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)的樣品。該方法通過(guò)使用微孔濾膜過(guò)濾樣品，微生物被截留在濾膜上，然后將濾膜轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基上。在適宜的條件下培養(yǎng)后，每個(gè)微生物細(xì)胞或聚集體將生長(zhǎng)成一個(gè)可見(jiàn)的菌落。這種方法可以直接在濾膜上計(jì)數(shù)菌落，或者通過(guò)顯微鏡觀察以獲取更精確的數(shù)量。

3、比濁法

比濁法是一種通過(guò)測(cè)量微生物懸液的光學(xué)性質(zhì)來(lái)估算微生物生物量的非直接方法。微生物細(xì)胞的存在會(huì)散射通過(guò)它們的光線，導(dǎo)致懸液的濁度增加。通過(guò)使用分光光度計(jì)測(cè)量特定波長(zhǎng)下的吸光度，可以估計(jì)微生物的數(shù)量。這種方法簡(jiǎn)單快捷，但需要建立針對(duì)特定微生物和培養(yǎng)條件的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4、ATP生物發(fā)光法

ATP生物發(fā)光法是一種基于微生物細(xì)胞內(nèi)ATP含量的快速微生物檢測(cè)技術(shù)。所有活的微生物細(xì)胞都含有ATP，ATP的存在被用作微生物存在的指標(biāo)。在加入熒光素酶和熒光素后，ATP觸發(fā)的發(fā)光反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生光信號(hào)，其強(qiáng)度與樣品中的微生物數(shù)量成正比。這種方法可以在幾分鐘內(nèi)提供結(jié)果，非常適合快速評(píng)估微生物污染水平。

5、快速檢測(cè)試劑盒

快速檢測(cè)試劑盒提供了一種標(biāo)準(zhǔn)化和簡(jiǎn)化的微生物檢測(cè)方法。這些試劑盒通常包含預(yù)制的培養(yǎng)基、必要的指示劑和標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)程序。用戶只需添加樣品，按照說(shuō)明書(shū)操作，即可在短時(shí)間內(nèi)獲得結(jié)果。這些試劑盒的設(shè)計(jì)旨在減少人為操作錯(cuò)誤，提高檢測(cè)的重復(fù)性和可靠性。

6、分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)方法，如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR，通過(guò)特異性擴(kuò)增微生物的DNA序列來(lái)檢測(cè)微生物。PCR方法可以檢測(cè)非常低水平的微生物DNA，而qPCR則能夠提供定量的結(jié)果。這些方法具有高度的靈敏度和特異性，可以檢測(cè)特定的微生物種類或菌株。

7、免疫學(xué)方法

免疫學(xué)方法，如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，利用抗原-抗體反應(yīng)的原理來(lái)檢測(cè)微生物。特定的抗體被用來(lái)識(shí)別和結(jié)合目標(biāo)微生物表面的抗原，然后通過(guò)酶標(biāo)記的二抗體產(chǎn)生可視化的顏色變化或熒光信號(hào)。ELISA方法可以設(shè)計(jì)成定性的或定量的，以適應(yīng)不同的檢測(cè)需求。

二、菌落總數(shù)檢測(cè)注意事項(xiàng)

1、樣品的采集

在采集樣品時(shí)，需要遵循以下原則：使用無(wú)菌工具和容器，避免樣品受到外界微生物的污染。確保采集的樣品能夠代表整個(gè)批次或區(qū)域的微生物狀況。采集后的樣品應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，減少微生物的生長(zhǎng)和死亡對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

2、培養(yǎng)基的選擇

常用的培養(yǎng)基有：適用于大多數(shù)細(xì)菌的生長(zhǎng)，是菌落總數(shù)檢測(cè)中最常用的培養(yǎng)基。適用于需氧菌和厭氧菌的培養(yǎng)，但不適合直接進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。根據(jù)檢測(cè)目的，可以選擇特定的選擇性培養(yǎng)基，以篩選特定類型的微生物。

3、培養(yǎng)條件的設(shè)定

培養(yǎng)條件包括溫度、濕度、光照和培養(yǎng)時(shí)間等。在設(shè)定培養(yǎng)條件時(shí)，應(yīng)注意：大多數(shù)細(xì)菌的最適生長(zhǎng)溫度為37°C，但某些細(xì)菌可能需要不同的溫度條件。保持適宜的濕度，避免培養(yǎng)基干燥或過(guò)度濕潤(rùn)。某些微生物對(duì)光照敏感，應(yīng)根據(jù)需要選擇光照條件。菌落的形成需要一定的時(shí)間，通常為24-48小時(shí)。

4、結(jié)果的分析

菌落總數(shù)的檢測(cè)結(jié)果通常以CFU（菌落形成單位）/mL或CFU/g表示。在分析結(jié)果時(shí)，需要注意以下幾點(diǎn)：對(duì)于菌落數(shù)量較少的樣品，可以直接計(jì)數(shù)；對(duì)于菌落數(shù)量較多的樣品，可以采用稀釋法進(jìn)行計(jì)數(shù)。準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品的菌落數(shù)量，以便于后續(xù)的數(shù)據(jù)分析。根據(jù)菌落總數(shù)的數(shù)值，評(píng)估樣品的微生物污染程度，并結(jié)合其他檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行綜合分析。