SN/T1196-2012轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)玉米檢測(cè)方法內(nèi)容是什么?百檢網(wǎng)檢測(cè)范圍廣泛，可根據(jù)客戶需求選擇合適的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)及項(xiàng)目安排檢測(cè)，全國(guó)近千家合作實(shí)驗(yàn)室，CMA/CNAS資質(zhì)齊全，可就近安排寄樣檢測(cè)。今天百檢網(wǎng)就給大家簡(jiǎn)單介紹一下SN/T1196-2012轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)玉米檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容。

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了玉米及其加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)的PCR方法和實(shí)時(shí)熒光PCR方法。

本標(biāo)準(zhǔn)的篩選檢測(cè)適用于玉米及其加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的定性檢測(cè)。

本標(biāo)準(zhǔn)的鑒定檢測(cè)適用于玉米MON810、Bt11、Bt176、T14/T25、CBH351、GA2l、MON863、NK603TC507、MON88017、59122、MIR604、MIR162、DBT418、MON89034、LY038、ES3272、Bt10、DP98140品系轉(zhuǎn)基因成分的定性檢測(cè)。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其*新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T 19495.1 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 通用要求和定義

GB/T 19495.2 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

GB/T 19495.3 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 核酸提取純化方法

GB/T 19495.7 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 抽樣和制樣方法

3 術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)

3.1 術(shù)語(yǔ)和定義

GB/T 19495.1 界定的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用本文件。

3.1.1 轉(zhuǎn)基因 transgene

將物種本身不具有的來(lái)源于其他物種的功能DNA序列，通各種導(dǎo)入手段，使其在該物種中進(jìn)行表達(dá)，以便該物種獲得新的品種特征。

3.1.2 內(nèi)源基因 endogenous gene

在栽培的物種中拷貝數(shù)恒定的、不顯示等位基因變化的基因。該基因可用于對(duì)基因組中某一目的基因的定量分析。

3.2 縮略語(yǔ)

GB/T 19495.1 界定的以及下列縮略語(yǔ)適用于本文件。

CaMV35S:35 S promoter from Cauliflower moshic virus，來(lái)自于花椰菜花葉病毒的35S啟動(dòng)子。

CDPK: calcium-dependent protein kinase(CDPK)gene，鈣依賴蛋白激酶基因

CrylA(b): a synthetic gene encodes the first 648 amino acids， insecticidal-active truncated product identical to that of cryLA(b) gene of Bacillus thuringiensis subsp。蘇云金芽孢桿菌殺蟲(chóng)毒蛋白 cryIA(b)基因

CrygC： insecticidal-active truncated product identical to that of Cry 9C gene of Bacillus thuringiensis subsp，蘇云金芽孢桿菌殺蟲(chóng)毒蛋白Cry9C基因

Ct值：C： Cycle，t; threshold，每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

EDTA：ethylene diaminetetraacetic acid，乙二胺四乙酸

HSP70：0.8 Kb intron from the hsp70gene(heat- shock protein)，來(lái)自熱休克蛋白(hsp70)基因的0.8Kb基因內(nèi)區(qū)

IVR：invertase 1 gene from maize，玉米的轉(zhuǎn)化酶1基因

IvS2：intron from the maize alcohol dehydrogenase gene，玉米乙醇脫氫酶基因的基因內(nèi)區(qū)2

mEPSPS：maize5- enolypyruvylshikimate-3 phosphate synthase，來(lái)源于玉米的莽草酸羥基乙酰轉(zhuǎn)移酶

NOS：terminator of nopaline synthase gene，胭脂堿合成酶基因終止子

NPTI：neomycin-3′- phosphotransferase gene，新霉素-3′-磷酸轉(zhuǎn)移酶基因

OTP：optimized transit peptide gene，優(yōu)化運(yùn)輸肽基因

P actin1：the promoter derived from the rice( Orya sativa) actin 1 gene，來(lái)源于玉米肌動(dòng)蛋白1基因的啟動(dòng)子

PAT：phosphinothricin acetyltransferase gene，草丁膦乙酰轉(zhuǎn)移酶基因

PCK：polymerase chain reaction，簡(jiǎn)稱PCR

TE：Tris-HCl、EDTA緩沖液

Tris：tris( hydroxymethyl) aminomethane，三(羥甲基)氨基甲烷

Taq：Thermus aquatica，水生熱棲菌

zein：玉米醇溶蛋白基因

4 防污染措施

檢測(cè)過(guò)程中防止交叉污染的措施按照GB/T 19495.2 中的規(guī)定執(zhí)行。

5 抽樣和制樣

5.1 取樣

按照GB/T 19495.7 中規(guī)定的方法執(zhí)行。

5.2 制樣

稱取約50g玉米樣品，經(jīng)干熱滅菌(150℃干熱預(yù)處理2h)或120℃、30min高壓消毒處理的碾缽或粉碎機(jī)中碾磨至樣品粉末顆粒約0.5mm左右大小。

6 普通PCR方法

6.1 原理

樣品經(jīng)過(guò)提取DNA后，針對(duì)轉(zhuǎn)基因植物所插入的外源基因的基因序列設(shè)計(jì)引物，通過(guò)PCR技術(shù)特異性擴(kuò)增外源基因的DNA片斷，根據(jù)PCR擴(kuò)增結(jié)果，判斷該樣品中是否含有轉(zhuǎn)基因成分。

6.2 試劑和材料

除另有規(guī)定外，其他試劑為分析純或生化試劑，水為按照GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。

6.2.1 引物：檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米內(nèi)、外源基因的引物及其信息見(jiàn)附錄A。

6.2.2 Tag dna聚合酶。

6.2.3 dNTPs：dATP、dTTP、dCTP、dGTP、dUTP。

6.2.4 瓊脂糖：電泳純。

6.2.5 溴化乙錠(EB)或其他染色劑。

6.2.6 三氯甲烷

6.2.7 異戊醇。

6.2.8 異丙醇。

6.2.9 70%乙醇。

6.2.10 相對(duì)分子質(zhì)量 Marker：50bp~300bp。

6.2.11 CTAB裂解液：3%(質(zhì)量濃度)CTAB，1.4mol/LNaC，0.2%(體積分?jǐn)?shù))巰基乙醇，20mmol/L EDTA， 100 mmol/L Tris-HCl， pH8.0

6.2.12 TE緩沖液：10mmol/ L Tris-HCl，pH8.0;1mmol/ L EDTA，pH8.0。

6.2.13 10×PCR緩沖液：100m mol/LKCl，160m mol/L(NH4)2SO4，20m mol/ L MgSO4，200m mol/LTris-HCl(pH 8.8)， 1%TritonX-100， 1 mg/mLBSA

6.2.14 5×TBE緩沖液：Tris54g，硼酸275g，0.5mol/ L EDTA(pH8.0)20mL，加蒸餾水至1000mL。

6.2.15 10×上樣緩沖液：0.25%溴酚藍(lán)，40%蔗糖。

6.2.16 RNA酶(10μg/mL)。

6.2.17 UNG酶( Uracil N-glycosylase)。

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